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实验室检测

抗原检测

抗原检测可用于区分定量（蛋白表达或分泌减少）和定性（功能）缺陷。常用的抗原检测方法主要有两种：酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶免疫测定法。ELISA使用一种特异性抗体对抗原进行捕获，并使用另一种酶标抗体对抗原含量进行检测，而乳胶免疫测定法采用的是单抗体系统。  

 

血管性血友病因子／因子VIII结合（VWF-FVIII结合）试验可用于2N亚型与2型VWD的其它亚型之间的鉴别，而血管性血友病因子多聚体分析通常在VWD初始检测之后进行，以帮助确定VWD亚型。凝血因子的抗原检测可用于区分凝血因子量和质的缺陷。

双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种常用的抗原检测试验。该试验首先是将可识别待测凝血因子的多克隆抗体包被于固体表面（通常是微孔板）上。随后加入稀释后的血浆样品，其中的待测抗原可被多克隆抗体识别。随后通过洗涤去除未结合抗原，并加入酶标抗体与底物结合。再次洗涤后，使用分光光度计检测并定量。含有已知浓度野生型抗原的稀释对照血浆用作对照品和校准品。

 

 

双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA). 

包被有抗原特异性抗体的乳胶微粒在抗原存在时可发生凝集。其凝集程度与样品中抗原的浓度成正比，并可通过对透射光或散射光的测量进行定量分析。

国际血栓与止血学会(ISTH)的因子XIII和纤维蛋白原SSC分委会推荐，在检测发现FXIII活性降低之后，应进行因子(F) XIII抗原检测，以确定FXIII缺乏的亚型（FXIII-A或FXIII-B缺乏）。1 如果血浆FXIII-A B浓度降低，则应进一步检测FXIII-A和FXIII-B抗原。1-3 FXIII抗原浓度可采用酶联免疫吸附试验(ELISA)或乳胶免疫测定法进行测量。2,4,5

 

酶联免疫吸附试验 (ELISA)

 

在定量ELISA中，FXIII特异性抗体被预先包被于微板。样本中的FXIII可与固相抗体和第二个FXIII特异性多克隆抗体结合形成三明治结构。酶标二抗可在加入底物后引发显色反应。

 

例如为检测血浆中的FXIII-A B，可使用固定在链霉亲和素包被孔中的FXIII-B生物素化单克隆捕获抗体，以及使用辣根过氧化物酶(HRP)标记的FXIII-A单克隆检测抗体。6 为检测FXIII-A或FXIII-B亚单位，生物素化捕获抗体和HRP标记的检测抗体仅与两个亚单位（FXIII-A或FXIII-B）中的一个发生反应，但针对相同抗原分子的不同表位。6

 


ELISA检测FXIII抗原原理示例7

 

乳胶免疫测定法

 

包被有人FXIII特异性抗体的乳胶颗粒可在FXIII存在的情况下产生凝集反应。其凝集程度与样本中FXIII的抗原水平成正比，并可通过对透射光或光散射的检测（具体参见相应试剂盒说明书）来进行评估。目前已商用的胶乳免疫测定试剂盒包括HemosIL®因子XIII抗原检测试剂盒（Werfen,Instrumentation Laboratory,Bedford,MA,USA）和K-Assay因子XIII检测试剂盒（Stago，AsnièressurSeine，France；Kamiya Biomedical Company，Seattle，WA，USA），其中前者可特异性检测FXIIIA抗原。

  1. Kohler HP, Ichinose A, Seitz R, et al. Diagnosis and classification of factor XIII deficiencies. J Thromb Haemost 2011;9:1404-6.
  2. Biswas A, Ivaskevicius V, Thomas A, Oldenburg J. Coagulation factor XIII deficiency. Diagnosis, prevalence and management of inherited and acquired forms. Hamostaseologie 2014;34:160-6.
  3. Bolton-Maggs PH, Favaloro EJ, Hillarp A, Jennings I, Kohler HP. Difficulties and pitfalls in the laboratory diagnosis of bleeding disorders. Haemophilia 2012;18 Suppl 4:66-72.
  4. Schroeder V, Kohler HP. Factor XIII deficiency: an update. Semin Thromb Hemost 2013;39:632-41.
  5. Opat S, Butler J, Malan E, Duncan E, Tran HA. Factor XIII assays. Methods Mol Biol 2013;992:171-80.
  6. Orosz ZZ, Katona E, Facsko A, Berta A, Muszbek L. A highly sensitive chemiluminescence immunoassay for the measurement of coagulation factor XIII subunits and their complex in tears. J Immunol Methods 2010;353:87-92.
  7. Katona E, Haramura G, Karpati L, Fachet J, Muszbek L. A simple, quick one-step ELISA assay for the determination of complex plasma factor XIII (A2B2). Thromb Haemost 2000;83:268-73.

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