血管性血友病因子检测

血管性血友病因子(VWF)通过与血小板表面的糖蛋白Ib/IX/V (GPIb/IX/V)复合物的结合促进血小板粘附，而纤维蛋白或纤连蛋白通过与血小板糖蛋白IIb/IIIa（GPIIb/IIIa；整合素α_IIb/β₃）复合物的结合介导血小板与血管壁的粘附作用。VWF活性检测可测量VWF结合血小板或GPIb的能力。VWF／因子VIII结合试验可用于2型血管性血友病(VWD)的2N亚型与其它亚型之间的鉴别。在对VWF进行初步实验室检测后，VWF多聚体分析有助于VWD各亚型之间的区分。

VWF瑞斯托霉素辅因子活性(VWF:RCo)是通过仪器（通常是聚集仪）对加入抗生素瑞斯托霉素后血小板聚集情况的测量来反映VWF与血小板结合的能力。此试验通常与VWF抗原检测同时进行，通过计算VWF抗原水平与VWF活性的比值来对VWD分型。然而，VWF:RCo试验室内和室间的差异可能会增加误诊的可能性。^1-5

VWF：糖蛋白-IbR (VWF:GPIbR)试验使用瑞斯托霉素诱导VWF与野生型血浆来源或重组GPIb的结合。该试验目前已可自动化进行，并可代替VWF:RCo对VWF活性进行测定，准确性和灵敏性较高。⁵

VWF：糖蛋白-IbM (VWF:GPIbM)试验也可以替代VWF:RCo用于VWD的鉴别诊断和分型。与VWF:RCo和VWF:GPIbR试验相似，VWF:GPIbM可以测量VWF的功能。然而，VWF:GPIbM试验是对 VWF与功能增强变异型GPIb蛋白（不依赖瑞斯托霉素）的结合能力进行测定，进而可以减少实验室内和实验室间的差异。联合VWF:GPIbM试验和VWF抗原检测，可计算VWF含量与活性的比值并用于VWD的初步分型。^2-5

瑞斯托霉素诱导的血小板聚集(RIPA)试验与VWF:RCo试验相似。该试验主要用于2B型VWD和血小板型VWD与2A型VWD之间的鉴别。RIPA试验中，通过仪器（通常是聚集仪）对患者富含血小板血浆在加入低浓度瑞斯托霉素后血小板聚集的情况进行测量。此时，2B型VWD和血小板型VWD患者血小板可发生聚集，而正常人和所有其他类型的VWD患者血小板不会聚集或仅有少量聚集。^1、4

血管性血友病因子血小板结合(VWF:PB)试验用于2B型VWD与2A型VWD、血小板型VWD和假性VWD患者之间的鉴别。VWF:PB试验将多聚甲醛固定的正常血小板暴露于低浓度的瑞斯托霉素，通过标记抗体来测量VWF的结合能力。2B型VWD患者VWF:PB升高，而在1型、2A型、2M型、2N型、3型VWD和血小板型VWD患者通常不能观察到样本与血小板的结合。^1、4

血管性血友病因子／因子VIII结合（VWF-FVIII结合）试验主要用于2N型与其它2型VWD的鉴别。该试验采用了改良的酶联免疫吸附试验(ELISA)技术。包被于微板的抗VWF抗体可捕获患者样本中的VWF，然后洗板去除样本中与VWF结合的内源性FVIII。随后在捕获了VWF的微板上加入已知浓度的重组FVIII。最后加入酶标记抗FVIII抗体来测量与患者VWF结合的FVIII水平。2N型VWD患者表现为与FVIII的结合能力降低。^6、7

血管性血友病因子(VWF)多聚体分析通常在VWD筛查试验后进行，以协助VWD的分型诊断。在该试验中，通过十二烷基硫酸钠(SDS)-琼脂糖凝胶电泳将VWF多聚体按分子量大小分离。使用靶向VWF的标记抗体可清楚观察到VWF多聚体的分布情况。也可使用蛋白质印迹技术将蛋白质从SDS-琼脂糖凝胶转移到膜上来进行分析，并通过免疫荧光技术对VWF多聚体的分布进行观察。^6、7

低分辨率凝胶可用于分离大分子量VWF多聚体，通常用于2A型和2B型VWD与1型、2M型、2N和3型VWD之间的鉴别。2A和2B型VWD患者通常缺乏高分子量VWF多聚体，而1型、2M型和2N型VWD患者VWF多聚体的分布正常。3型VWD患者则不能检出VWF多聚体。⁶

典型VWD多聚体分析结果。⁶

1. Nichols WL, Hultin MB, James AH, et al. von Willebrand disease (VWD): evidence-based diagnosis and management guidelines, the National Heart, Lung, and Blood Institute (NHLBI) Expert Panel report (USA). Haemophilia 2008;14:171-232.
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4. James AH, Eikenboom J, Federici AB. State of the art: von Willebrand disease. Haemophilia 2016;22 Suppl 5:54-9.
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6. Nichols WL, Hultin MB, James AH, et al. von Willebrand disease (VWD): evidence-based diagnosis and management guidelines, the National Heart, Lung, and Blood Institute (NHLBI) Expert Panel report (USA). Haemophilia 2008;14:171-232.
7. James AH, Eikenboom J, Federici AB. State of the art: von Willebrand disease. Haemophilia 2016;22 Suppl 5:54-9.